ارزیابی پاسخ های ایمنی مخلوط پروتئین های نوترکیب pora- pilq406-770به همراه omv نایسریا مننژیتیدیس سرو گروه b درموش balb/c

نایسریا مننژیتیدیس دیپلوکوک گرم منفی کپسولدار و عامل مننژیت و سپتی سمی باکتریایی می-باشد. در حالیکه واکسن های کونژوگه پلی ساکاریدی علیه عفونت های ایجاد شده توسط سروگروه های a, c, y, w135 در دسترس می باشد؛ واکسنی جهت پیشگیری از بیماری ایجاد شده توسط سروگروه b وجود ندارد، چرا که واکنش متقاطع کپسول سروگروه b با گلیکوپروتئین های سطح سلول های جنینی انسان، تلاش ها جهت طراحی واکسن مناسب علیه این سروگروه را با مشکل مواجه کرده است. هدف از مطالعه حاضر تهیه پروتئین های نوترکیب پورین کلاس یک (pora) و قطعه ای از c ترمینال سکرتین pilq (pilq406-770) و استخراج وزیکول غشاء خارجی (omv) نایسریا مننژیتیدیس سروگروه b و نیز بررسی پاسخ های ایمنی آنها به عنوان کاندیدایی مناسب جهت ادامه تحقیقات در مسیر تهیه واکسن علیه سروگروه b می باشد. ژن های کد کننده پروتئین-های مذکور از ژنوم نایسریا مننژیتیدیس atcc13090 به روش pcr جدا شده و با هضم آنزیمی به داخل وکتورهای pet28a و pet32a وارد شدند. سپس به داخل میزبان های کلونینگ و بیانی ترانسفورم و بیان شدند. پس از خالص سازی پروتئین های نوترکیب به روش کروماتوگرافی تمایلی توسط رزین نیکل، واکنش پذیری ایمنی آنها نیز توسط وسترن بلات بررسی گردید. با روش های هضم آنزیمی، pcr و تعیین توالی مشخص شد که ژن های مورد بررسی به درستی درون وکتورها کلون شده اند. نتایج sds-page نیز صحت بیان پروتئین ها را تائید نمود. در مرحله بعد پاسخ های ایمنی تولید شده نسبت به مخلوط این پروتئین های نوترکیب و همچنین هر یک از پروتئین ها بطور جداگانه همراه با omv یا ادجوانت فروند در موش های balb/c بررسی شد. تلقیح زیر جلدی پروتئین ها موجب تحریک قابل توجه آنتی بادی های igg، igg1 و igg2a سرمی ضد پروتئین های نوترکیب گردید. آنتی سرم های تولید شده علیه پروتئین های نوترکیب، با سروگروه های a و b مننگوکوک میانکنش سطحی داشته و همچنین علیه این سروگروه ها فعالیت باکتریسیدال و اپسونیک نشان دادند. این اثرات در حالت مخلوط دو پروتئین به همراه omv بیشتر از هر یک از پروتئین ها به تنهایی بود (p<0.001). در واقع نتایج این تحقیق نشان داد که مخلوط پروتئین های pilq406-770-pora به همراه omv بطور موثری قادر به تحریک آنتی بادی های باکتریسیدال علیه سروگروه b مننگوکوک می باشد.